Content on this page requires a newer version of Adobe Flash Player.

Get Adobe Flash player

Главная Статьи Заливочные среды

Заливочные среды

Заливочные среды

Для получения тонких (до 6 мкм) гистологических срезов необходимо фиксированный и промытый материал залить в плотную среду, предварительно пропитав ею кусочки тканей. В зависимости от способа растворения все заливочные среды разделяются на растворимые в органических растворителях и водорастворимые.  К первым относятся парафин, пластические полимеры на основе парафина, целлоидин, ко вторым – желатин, полиэтиленгликоли, полиэфиры, некоторые метакрилаты.


Парафин – смесь высокомолекулярных предельных углеводородов, продукт перегонки нефти; растворяется в анилине, бензоле, бергамотном масле, целлозольве, хлороформе, декалине, диоксане, бутаноле, пропаноле, толуоле, трихлориэтилене, ксилоле. Каждый из этих растворителей можно использовать в качестве промежуточной среды между спиртом и парафином.
Температура плавления различных парафинов находится в диапазоне от 27 до 62˚С. В гистологической технике применяют парафин с температурой плавления 56˚С.
Ряд зарубежных фирм производят специальный парафин для гистологических исследований, содержащий различные пластические полимеры, такие как диметилсульфоксид («Парапласт», «Гистопласт С», «Гистозес»). Отдельно следует выделить новую гомогенизированную парафиновую среду для заливки Histomix®, содержащую в своем составе натуральный воск и синтетические полимерные добавки.
С точки зрения гистологической техники условия затвердевания парафина при заливке объекта весьма важны. Когда расплавленный парафин начинает затвердевать, на его поверхности возникает пленка в виде хлопьевидного облака, а затем начинают образовываться кристаллы, из которых состоит твердый парафин. Это изменение состояния парафина влечет за собой уменьшение его объема приблизительно на 5-10%, что обусловливает константные деформации заделанной в парафин ткани. Кристаллы парафина имеют форму пластинок или игл более или менее тонких, в зависимости от охлаждения. Чем охлаждение медленнее, тем тоньше кристаллы. Следует отметить, что кристаллы, выпадающие в тканевых пространствах при заключении объекта в парафин, не оказывают деформирующего влияния по причине своих небольших размеров. Когда парафин начинает затвердевать – он непрозрачен, затем становится прозрачным, с блестящей поверхностью. В этот момент сжатие парафина прекращается.
Весьма важную роль в затвердевании парафина играет растворенный в нем воздух. При охлаждении определенного объема парафина сперва затвердевает его поверхностный  слой. Поскольку растворимость воздуха в застывающем парафине снижена, в месте соприкосновения жидкого парафина и затвердевающего слоя выделяется воздух. Часть этого воздуха растворяется в более теплой и еще жидкой центральной массе, а другая часть остается в газообразном состоянии между кристаллами парафина. Таким образом могут создаваться полости, заполненные воздухом. Это обусловливает зернистый вид в центре блока после его затвердевания. Чтобы избежать подобной грануляции парафина в ходе заделки объекта, можно применять различные средства. Небольшие кусочки ткани (2-3 мм) можно заделывать на часовом стекле в малом количестве парафина, который медленно наливают пипеткой. При более крупных объектах хорошие результаты дает заливка в глубоком и узком сосуде; при этом затвердевание парафина начинается в глубине и распространяется кверху, а освобождающийся воздух выделяется на поверхности.
Для заливки в парафин объект необходимо сперва обезводить, затем провести через промежуточную среду, растворимую как в парафине, так и в спирте.
Таким образом, в процессе заливки объекта в парафин выделяют четыре основных этапа:
- обезвоживание спиртом,
- пропитывание промежуточной средой (ксилол, толуол, бензол и др.),
- пропитывание парафином,
- окончательное заключение в парафин.

Целлоидин – хорошо растворяющаяся в эфире нитроклетчатка. В гистологической практике применяют 2%, 4% и 8% растворы целлоидина, которые готовят из целлоидиновых пластин или отмытой от эмульсии и высушенной рентгеновской пленки.
Заливка ткани в целлоидин в настоящее время менее популярна, чем парафиновая, и ее применяют главным образом для заливки труднорежущихся тканей и объектов больших размеров, с которых трудно получить хорошие парафиновые срезы. Целлоидиновую заливку используют также в тех случаях, когда необходимо избежать воздействия на исследуемый материал высоких температур. Кроме того, заливка материала в целлоидин позволяет получить лучшие результаты при наличии в объектах больших полостей, лакун и слоев различной консистенции.
Эфир и сухой целлоидин огнеопасны, поэтому при работе с ними следует соблюдать осторожность.
 

Заливка в целлоидин-парафин рекомендуется для обработки объектов, которые легко сжимаются при парафиновой заливке, например органов кроветворения, мезенхимной ткани, а также органов и тканей, имеющих многослойное строение (трахея, кожа и др.). При этом используются выгодные стороны обоих методов.
 

Заливка в желатин находит широкое применение при изучении объектов, легко распадающихся при резке на крио-микротоме, при изготовлении срезов с органов, богатых соединительной тканью, изучении эмбриональных объектов, а также жировых и липоидных включений. Используют кристаллический прозрачный пищевой желатин, из которого готовят 25% и 12.5% растворы.
 

Заливка в водораствормые пластмассы хорошо зарекомендовала себя в гистохимии, особенно для выявления липидов и ферментов. Используются синтетические пластмассы – полиэтиленгликоль, поливакс, метилметакрилат и др.